Resveratrolün Ph+ Akut Lenfoblastik Lösemide Terapötik Potansiyeli ve Resveratrol Tarafından Tetiklenen Apoptozda Seramid Metabolizmasının Rolü

Abstract

Proje ile resveratrolün, Ph+ ALL hücreleri üzerindeki büyümeyi inhibe edici etkisinin arkasında yatan mekanizmalar, seramid metabolizmasının hedeflenmesi ve BCR-ABL ifadesindeki değişimler ile ilişkilendirilerek araştırılmıştır. Resveratrol, SK inhibitörü (SKI II), GSS inhibitörü (PDMP), SPT inhibitörü (Miriosin, Myriocin) ve resveratrol: inhibitör kombinasyonlarının in vitro olarak Ph+ ALL SD1 ve SUP-B15 hücreleri üzerindeki büyümeyi durdurucu ve apoptotik etkileri MTT hücre çoğalması testi, Aneksin-V/PI boyaması, kaspaz3, PARP ifadelerinin ve sitokrom c salınımının belirlenmesi (western blot) ile, sitostatik etki (hücre döngüsü üzerindeki) ise akım sitometresi (PI boyaması) ile araştırılmıştır. Resveratrol ve sfingolipid metabolizması enzimlerini hedefleyen inhibitör kombinasyonlarının BCR-ABL protein ifadesi üzerine etkisi western blot ile belirlenmiştir. Ayrıca, resveratrolün SPT, SK-1/2, GSS protein ifadeleri üzerindeki etkisi western blot ile belirlenmiştir. Her iki hücre hattında resveratrol ve SKI II ve PDMP ile kombinasyonları hücre büyümesini baskılamış, apoptozu tetiklemiş ve hücre döngüsünü S fazında tutmuştur. Resveratrol:Miriosin kombinasyonu ise hücre büyümesi ve hücre döngüsü üzerinde hücreye özgü etkiler gösterirken apoptozu her iki hücrede tetiklemiştir. Her iki hücre tipinde resveratol ve kombinasyonları sitokrom-c salınımını, kaspaz-3 kesimini ve PARP kesimini genel olarak arttırmakla beraber hücreye özgü değişimler de saptanmıştır. Resveratrol her iki hücrede SK-1/SK2 ve GSS ifadesini azaltırken SPT ifadesini arttırmıştır. Resveratrol, SKI II ve PDMP BCR-ABL ifadesini azaltırken Miriosin arttırmıştır. Resveratrol: SKI II ve PDMP kombinasyonları BCR-ABL üzerinde artışlara neden olurken Miriosin ile kombinasyon BCR-ABL ifadesini azaltmıştır. Sonuç olarak, resveratrol seramid metabolizmasını ve BCR-ABL ifadesini düzenleyerek Ph+ ALL üzerinde hücre büyümesini baskılamış ve apoptozu tetiklemiştir.

In this project, it is aimed to identifiy potential mechanisms behind resveratol-mediated growth inhibitory effects in association with targeting of sphingolipid metabolism and regulation of BCR-ABL on Ph+ ALL cells. To investigate the effect of treatment with resveratrol combined with the inhibitors of sphingolipid metabolizing enzymes, SK (SKI II), GCS (PDMP) and SPT (Myriocin), on Ph+ ALL SD1 and SUP-B15 cell growth inhibition and apoptosis in vitro, the cells were incubated with different concentrations of resveratrol and SK, GCS, SPT inhibitors alone and with the combinations of resveratrol and the inhibitors. The cell growth inhibition was evaluated using the MTT assay. Apoptosis was determined using Annexin V/propidium iodide double staining and measuring protein levels of caspase-3, PARP and cytochrome c release by western blot. Cytostatic effects (effects on cell cycle) of each agent alone and combinations were evaluated by PI staining. The effects of resveratrol on BCR-ABL, SPT, SK-1/2 and GCS protein expression, and its combinations on BCR-ABL protein expression were checked by western blot. In both cell lines, resveratrol and its combinations with SKI II and PDMP supressed cell growth, induced apoptosis and caused cell cycle arrest at the S phase. However, resveratrol: Myriocin combination showed cell type specific effects on the cell growth and cell cycle progression while induced apoptosis in both cell lines. In general, resveratrol and its combinations triggered cytochrome-c release, caspase-3 and PARP clevage, however, for some cases, there were cell specific responses. Resveratrol supressed SK-1/2 and GCS protein expression while increased SPT expression. BCR-ABL expression decreased after resveratrol, SKI II and PDMP treatment, however, Myriocin caused increases. Resveratrol: SKI II and PDMP combinations increased BCR-ABL expression while resveratrol: Myriocin combination increased its expression level. In conclusion, resveratrol supressed cell proliferation and induced apoptosis through targeting sfingolipid metabolism and modulating BCR-ABL expression.